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CTB缓冲液(除菌)搭配我公司的EB缓冲液(除菌)，用于猪链球菌感受态的制备。

• 感受态细胞的制备：
  
  • 挑猪链球菌2型菌SC-19单菌落于10mL加5%牛血清的TSB中，37℃摇床培养过夜。
    
  • 以1:100的比例转接于TSB培养基中，37℃摇菌2～3h，使菌液处于对数生长期(OD600约为0.3～0.5)。
    
  • 6000rpm离心1min。弃上清。以100mL菌液为例。
    
  • 用10mL的CTB重悬菌液，轻柔混匀，4℃ 6000rpm离心1min，弃上清，用10mL的CTB重悬，冰浴30min。
    
  • 4℃ 6000rpm离心1min，弃上清，用10mL的EB缓冲液洗两次。
    
  • 离心弃上清，用500μL的EB甘油缓冲液(EB缓冲液加15%的甘油)重悬菌体沉淀，按100μL分装。
• 转化：
  
  • 在100μL感受态细胞中，加入质粒混匀，加入电转杯中，电击。
    
  • 电击后，加入500μL的在37℃预热的含胎牛血清的TSB中，37℃摇床孵育2h。
    
  • 将菌液涂布于相应的抗性筛选的TSA平板，28℃培养24～32h，得到含有穿梭质粒的链球菌单菌落。